组合两种体外方法鸡胚绒毛尿囊膜血管试验(CAMVA)和牛角膜浑浊及通透试验(BCOP)评价个人护理品的眼刺激,为个人护理用品的眼刺激性的体外评价提供数据支持。方法分别采用CAMVA、BCOP和Draize兔眼试验对45种个人护理产品进行测试,并预测眼刺激分类。
CAMVA实验:将SPF级白莱航鸡胚孵育至第4天,吸取约3 ml蛋清后继续培养至第14天。开壳暴露CAM膜放置O形环,取40μl(固体40 mg)不同浓度受试物直接加于环内,37℃孵育30 min后观察血管变化,观察阳性反应(充血、鬼影血管、出血等)鸡胚数,计算RC50(使半数鸡胚出现阳性反应的受试物浓度)。以RC503预测产品无眼刺激性,RC503预测可能眼刺激性。
BCOP实验:从屠宰场获得新鲜牛眼,放入冰冷HBSS运回实验室。分离并选取完好角膜装配于支架中。培养箱平衡1 h,移除前室培养基后加入750μl受试样品,培养箱孵育10 min,去除受试物,后孵育2 h。读取角膜浊度。加入荧光素钠溶液,孵育90 min后收集后室液体,490 nm波长下读取吸光度值。计算体外评分(IVIS)=浊度值+15x吸光度值。如IVIS≤25,预测无/弱刺激性;25IVIS值≤55,预测中度刺激性;IVIS55,预测严重刺激性/腐蚀性。
结果采用CAMVA法可以全部区分33种无刺激性样品,采用BCOP法可全部区分12种刺激性样品,其中CAMVA与体内实验区分无刺激性样品的一致性为(84.8%),BCOP与Draize试验区分刺激性样品的一致性为83.3%。
CAMVA和BCOP组合可对全部样品的眼刺激性正确分类,准确性达到100%。结论 CAMVA实验模拟结膜的损伤,对于检测化合物的从无刺激性到中度眼刺激性效果较好,适合作为个人护理用品配方、醇类物质和表面活性剂的筛选。
BCOP实验适用于检测中度、重度和极重度眼刺激性物质,但对区分轻度到轻微水平的刺激物不太敏感。组合BCOP与CAMVA的整合试验策略可用于个人护理品的眼刺激评价,其预测范围可覆盖无刺激性到严重刺激性。
